QUANTITATIVE DETERMINATION OF RESVERATROL FROM DIFFERENT FRUITS AND ISOLATION OF RESVERATROL FROM GRAPE SEEDS

Abstract

Resveratrol, bitkilerde bulunan biyolojik en önemli stilojen sınıfı olarak sıralanmıştır. Resveratrol'ün antioksidan, antikanser, antiinflamatuar, damar gevşetici, anti-diyabetik, yaşlanmayı geciktirici ve genel antimikrobiyal aktiviteleri olduğu kanıtlanmıştır. Bu araştırmada, resveratrolün siyah üzüm çekirdeğinde izole edilerek, saflaştırılması için ince tabaka kromatografisinde (TLC) değişik çözücü sistemleri kullanıldı. TLC'de tercih edilen çözücü sistemi kolon kromatografisi ve HPLC ile resveratrolün tayin edilmesinde kullanıldı. Elde ettiğimiz sonuçlarda resveratrolün, Vitis vinifera (üzüm) tohumunun ham ekstresinden ayrıştırılması için en iyi mobil fazın, 9: 1: 1 oranında kloroform: metanol: asetonitril olduğu, ince tabaka (TLC) kromatografisi ile belirlendi. Kolon kromatografisinin optimizasyonu için, silika jel, alümina, dowex katyon değiştirici, dowex anyon değiştirici ve florisil adsorbanların hepsi, TLC analizinden oluşturulan aynı en iyi mobil faz sistemini kullanarak, alümina hariç ham ekstrakttan resveratrol ayırmak için uygun olduğu belirlendi. Resveratrolü izole etmek için Silika jel > Florisil > Dowex katyon değiştirici > Dowex anyon değiştirici,sırasıyla tercih edilebilir. Resvetrolü kaynağından çıkarmak için önce heksan: etilasetat (9: 1) çözücü sistemi kullanıldı ve daha sonra kloroform: metanol: asetonitril (9: 1: 1) çözücü sistemi kullanılarak ham bitki özünden resveratrol izole edildi. Cis ve trans resveratrol'ün belirlenmesinde Agilent 5 TC-C18 kolonu (25.0 cm x 4.60 mm x 5.0 um) kullanıldı. Mobil faz olarak metanol: asetonitril :% 1.0 fosforik asit çözeltisi (6: 1: 3 v /v), 1.0 mL/dak akış hızına tercih edildi. Cis resveratrol ve trans resveratrolün maksimum absorbans yaptığı dalga boyunun ise 308 nm olduğu gözlendi. Ayrıca saflaştırılan resveratrolün NMR spektrumu da alınarak HPLC ile alınan sonuçlar ve yapı tayini test edilmiş oldu. Optimize edilmiş olan tüm bu şartlar uygulanarak cis ve trans formdaki esveratrolün HPLC ile kantitatif tayini için bazı gıda / meyve / bitki örneklerinden analizler gerçekleştirildi.Resveratrol has been ranked as the most biologically important class of stilbenoid found in plants. It has been proven to have antioxidant, anticancer, anti - inflammatory, vasorelaxer, anti-diabetic, anti-aging and general antimicrobial activities. This nobel molecule resveratrol is investigated in this research work, with a special interest in isolating and purifying this molecule, in this end optimmization methods for TLC, column chromatography as well as HPLC for resveratrol were investigated, at the same time presence of resveratrol qualitatively and quantitatively from some samples of food/fruits/herbs ( twenty two of them) exclusively obtained from Turkey were also investigated. Our results and finding shows that the best mobile phase to seperate resveratrol from crude extract of Vitis vinifera (grape) seed is chlorofaorm: methanol: acetonitrile with propotion ratio of 9:1:1, this is on TLC plate coated with silica gel 60, for optimization of column chromatography, silica gel, alumina, dowex cation exchanger, dowex anion exchanger and florisil adsorbents were all found to separate resveratrol from crude extract with exception of alumina, using the same best mobile phase system established from TLC analysis, the sequence by with these column fillers can be use to isolate resveratrol is Silica gel > Florisil > Dowex cation exchanger > Dowex anion exchanger, gardients elution using two sets of solvent system of hexane:ethylacetate; 9:1, and then follows by chlorofaorm: methanol: acetonitrile 9:1:1 was found to be the best way to isolate resveratrol from complex crude plant extract. Agilent 5 TC-C18 column (25.0 cm x 4.60 mm x 5.0 ?m) was used in the determination of cis resveratrol and trans resveratrol. Methanol: Acetonitrile: 0.1% phosphoric acid solution (6:1:3 v/v) used as a mobile phase with the flow rate of 1.0 mL/min. The maximum absorbance of cis resveratrol and trans resveratrol was 308 nm. NMR analysis used in this work shows a spectra which confirmed the presence and purity of extracted resveratrol. This research work established presence of resveratrol from many foods/fruits/herbs which has never been reported before and also established a better column chromatographic condition to isolate resveratrol from any plant source.