Purification and prokaryotic cloning of nucleoprotein (NP) gene of rinderpest virus (RPV) RBOK vaccine strain - Tonbak, Sükrü; Özdarendeli, Aykut; Doymaz, Mehmet Ziya; Bolat, Yusuf (My University, 2005)
Bu çalışmada sığır vebası virusu'RBOK aşı susu (SV-RBOK) nükleoprotein (NP) geninin prokaryotik hücrede klonlanması amaçlanmıştır. Vero hücreleri RBOK aşı susu ile infekte edildi. İnfekte hücrelerden toplam RNA'lar elde edilerek tersine transkripsiyonla NP geni kopya DNA'ları elde edildi. NP geni özgül primerler kullanılarak polimeraz zincir reaksiyonu ile çoğaltıldı. SV-RBOK NP geni Hindlll ve Kpnl enzimleri kullanılarak PinPointTM Xa-3 plazmidine klonlandı. E.coli hücresinde sentezlenen rekombinant NP protein pürifiye edildi. Yaklaşık 80kDa moleküler ağırlığındaki NP proteinini belirlemek için western blotlama yapıldı.
Keywords: Soy; saflaştırma; SDS-PAGE; tamamlayıcı DNA; polimeraz zincir reaksiyonu; genler; DNA klonlama; nükleoproteinler; sığır vebası virüsü; rekombinant protein; western blotting; plasmid vektör