Hepatit B virüs core antijeni (HBcAg) geninin Escherichia coli'de klonlanması - Bulut, Yasemin; Doymaz, Mehmet Ziya (My University, 2001)
Bu çalışmada, Hepatit B virüsünün \"core\" antijen (HBcAg) geni rekombinant DNA teknolojisi kullanılarak Escherichia coli'de klonlanmıştır. Bu amaçla çalışmanın ilk aşamasında, hepatit B virüsü (HBV) ile enfekte bireylerin serum örneklerinden HBV DNA'sı izole edilmiş ve bu DNA'dan HBcAg'ni kodlayan, 550 baz çifti uzunluğunda gen bölgesi polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile çoğaltılmıştır. Daha sonra, HBcAg genini içeren rekombinant plazmidin oluşturulması, E.coli'ye transformasyonu ve rekombinant plazmidlerin tanımlanması yapılmıştır. Plazmid vektör (pUC 19) ve HBcAg geni EcoRI ve Hind III restriksiyon endonükleaz enzimleriyle sindirilmiş, HBcAg geni plazmide yerleştirilmiş ve oluşturulan pHBC-1 plazmidi E.coli hücrelerinin transformasyonunda kullanılmıştır. Transformasyona uğrayan E.coli hücreleri ampisilin içeren ortamda seçilmiş ve rekombinant plazmidlerin (pHBC-1) HBcAg genine sahip oldukları PCR ve restriksiyon enzim analizi yapılarak doğrulanmıştır.
Keywords: Escherichia coli; Hepatit B virüsü; Polimeraz zincir reaksiyonu; Hepatit B kor antijenleri; Genler; Klonlama; organizma