KOYUN VE KEÇİLERDE YAĞ DOKU KÖKENLİ MEZENKİMAL KÖK HÜCRELERİN İZOLASYONU VE İDENTİFİKASYONU

Abstract

Günümüzde hayvan hastalıkları için kök hücre tedavi metotları geliştirilmekte ve özellikle Mezenkimal kök hücre (MKH)'ler ile başarılı sonuçlar elde edilmektedir. Hayvan modelleri, beşeri hekimlikteki olası uygulamalar için kök hücrelerin özelliklerini ve potansiyellerini incelemek amacıyla yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu çalışma koyun ve keçilerde yağ doku kökenli kök hücrelerin tespiti, karakteristik özellikleri ile adipojenik, kondrojenik ve osteojenik farklılaşma potansiyellerinin ortaya konulması amacıyla yapılmıştır. Çalışmamızda kesimhanede kesilen sağlıklı ve yetişkin 5 koyun ve 5 keçiden steril şartlarda inguinal bölgeden alınan yağ dokular kök hücre laboratuvarımıza getirilerek hücre kültür ve pasajlamalara tabi tutuldu. Aynı zamanda kök hücrenin ispatında önemli bir diğer aşama olan farklılaştırma işlemi gerçekleştirildi. Mezenkimal kök hücreler adipojenik, kondrojenik ve osteojenik yönde farklılaştırılıp histokimyasal boyama işlemlerine tabi tutuldu. İzolasyon işleminde kök hücrelerin morfolojik olarak ispatını sağlayan self renewal (kendi kendini yenileme) ve asimetrik bölünme aşamaları gözlemlendi. Keçi MKH'leri koyun MKH'lerine göre daha hızlı şekilde doluluk oranına (konfluense) ulaştı. Pasaj 3'e getirilen yağ doku kaynaklı kök hücreler kimliklendirme işlemi için Akım (flow) sitometri cihazında CD44, CD90, CD105 ve CD45 antikorları kullanılarak yüzey belirteçleri belirlendi. CD44, CD90, CD105 eksprese edilirken CD45 belirteci eksprese edilmedi. Çalışmamızda, veteriner hekimlikte önemli türler arasında yer alan koyun ve keçilerden yağ doku kaynaklı kök hücrelerin tespiti, karakteristik özellikleri ve başka hücrelere farklılaşma (osteojenik, kondrojenik ve adipojenik) yetenekleri belirlenmiş, koyun ve keçi MKH izolasyon farklılıkları ortaya konmuştur. Ayrıca, bu çalışmada yüzey belirteçleri (CD44, CD90, CD105, CD45) ile MKH immunofenotiplemesi koyun ve keçilerde ülkemizde ilk defa yapılmıştır. Çalışmanın veteriner hekimlikte bundan sonraki MKH çalışmalarına önemli bir katkı sağlayacağı düşünülmektedir.

Today, stem cell therapies are being developed for animal diseases and successful results are obtained especially with mesenchymal stem cells (MSCs). Animal models are widely used to study the properties and potential of stem cells for possible applications in human medicine. This study was carried out to detect adipose tissue-derived stem cells in sheep and goats, to reveal their characteristic features and adipogenic, chondrogenic and osteogenic differentiation potentials. In our study, fat tissues were taken from the inguinal region under sterile conditions from 5 healthy and adult sheep and goats slaughtered in the slaughterhouse were brought to our stem cell laboratory and subjected to cell culture and passage. At the same time, the differentiation process, which is another important step in the proof of the stem cell, was carried out. Mesenchymal stem cells were differentiated adipogenic, chondrogenic and osteogenic and subjected to histochemical staining processes. In the isolation process, self-renewal and asymmetrical division stages were observed, providing morphological proof of stem cells. Goat MSCs reached confluence faster than sheep MSCs. Surface markers were determined by using CD44, CD90, CD105 and CD45 antibodies in a flow cytometry device for the identification of adipose tissue-derived stem cells brought to Passage 3. CD44, CD90, CD105 were expressed while CD45 marker was not. In our study, detection of adipose tissue-derived stem cells from sheep and goats, which are among the important species in veterinary medicine, their characteristics and differentiation into other cells (osteogenic, chondrogenic and adipogenic) abilities were determined, and the isolation differences of sheep and goat MSCs were revealed. In addition, in this study, surface markers (CD44, CD90, CD105, CD45) and MSC immunophenotyping were performed for the first time in sheep and goats in our country. It is thought that the study will make an important contribution to future MSC studies in Veterinary Medicine.