LİKEN PLANUSTA GEÇİCİ RESEPTÖR POTANSİYELİ MELASTATİN 2, GLUTATYON PEROKSİDAZ 4 VE SPEXİN İMMUNREAKTİVİTESİNİN İMMUNOHİSTOKİMYASAL OLARAK İNCELENMESİ

Abstract

Bu çalışmada Liken planus (LP) tanısı konmuş hastalardan alınan doku örneklerinden geçici reseptör potansiyeli melastatin-2 (TRPM2), glutatyon peroksidaz-4 (GPX4), spexin (SPX) immünreaktivitelerinin immünhistokimyasal olarak incelenmesi amaçlandı. Çalışmaya hasta grubunu oluşturacak 20 adet LP tanısı konmuş deri dokusu örneği, kontrol grubunu oluşturacak 20 adet sağlıklı deri dokusu örneği olmak üzere toplam 40 adet deri dokusu örneği patoloji arşivinden elde edildi. Diğer dermatolojik hastalık veya malignite tanısı konmuş ve diabetes mellitusu olan hastaların doku örnekleri çalışmaya alınmadı. Elde edilen deri örneklerinin tanıları doğrulandıktan sonra parafin bloklardan 5-6 µm kalınlığında alınan doku kesitlerine TRPM2, SPX ve GPX4 için indirekt immünuhistokimyasal boyama yapıldı. Bu yöntemle primer antikorla nemli ortamda inkübe edilmiş dokulara biyotinli sekonder antikor uygulanarak ve streptavidinli enzimle (peroksidaz veya alkalen fosfataz) inkübasyon yapılarak enzim substratı olan AEC veya DAB kromojenleri uygulandı. Boyamada immünreaktivitenin yaygınlığı (0.1: <%25, 0.4: %26-50, 0.6: %51-75, 0.9: %76-100) ve şiddeti (0: yok, +0.5: çok az, +1: az, +2: orta, +3: şiddetli) kriter alınarak bir histoskor oluşturuldu. Hesaplamalarda histoskor = yaygınlık x şiddet formülü kullanıldı. Elde edilen veriler statistical package for the social sciences (SPSS, version 22.0) (Chicago, IL, USA) paket programı kullanılarak analiz edildi. Kolmogorov-Smirnov ve Shapiro-Wilk normallik testleri yapıldıktan sonra iki gruplu değişkenlerde bağımsız örneklem t testi iki gruptan fazla değişkenlerde ise varyans analizi (ANOVA) kullanıldı. p<0.05 değeri istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. Bu çalışmada hasta ve kontrol grubu arasında demografik özellikler açısından anlamlı bir farklılık tespit edilemedi (p>0.05). TRPM2 histoskor ortalaması LP'li hasta grubunda 0.26±0.09 kontrol grubuna 0.97±0.17 kıyasla istatistiksel olarak anlamlı azalmış olduğu saptandı (p<0.001). GPX4 histoskor ortalaması LP'li hasta grubunda 0.20±0.06 kontrol grubuna 0.97±0.17 kıyasla istatistiksel olarak anlamlı azalmış olduğu saptandı (p<0.001). SPX histoskor ortalaması LP'li hasta grubunda 1.19±0.34 kontrol grubuna 0.38±0.06 kıyasla istatistiksel olarak anlamlı artmış olduğu saptandı (p<0.001). Cinsiyet ve yaş dağılımını açısından değerlendirildiğinde LP'li hastalar ve kontrol grubunda TRPM2, SPX ve GPX4 histoskorları arasında istatistiksel olarak anlamlı bir farklılık bulunmadı (p>0.05). Sonuç olarak uzun zamandan beri LP'nin patogenezinde apoptozis suçlanmaktadır. Biz bu çalışma ile TRPM2 kanallarının, ferroptozisin ve SPX'in de LP patogenezde önemli faktörler olabileceğini gösterdik. Bu faktörlerin patogenezdeki yerinin daha net anlaşılması için moleküler düzeyde yapılması gereken çalışmalara ihtiyaç vardır. Anahtar Kelimeler: Liken planus, geçici reseptör potansiyeli melastatin-2, glutatyon peroksidaz-4, spexinImmunohistochemical Examination of Immunoreactivity of Transient Receptor Potential Melastatin 2, Glutathione Peroxidase 4 and Spexin in Lichen Planus In this study, we aimed to investigate the immunohistochemical reactivities of transient receptor potential melastatin-2 (TRPM2), glutathione peroxidase-4 (GPX4), spexin (SPX) from tissue samples taken from patients diagnosed with lichen planus (LP). A total of 40 skin tissue samples were obtained from the pathology archive, including 20 samples of skin tissue diagnosed with LP that will constitute the patient group and 20 healthy skin tissue samples that will constitute the control group. Tissue samples of patients diagnosed with other dermatological diseases or malignancies and diabetes mellitus were excluded from the study. After confirming the diagnosis of the obtained skin samples, indirect immunohistochemical staining for TRPM2, SPX and GPX4 was performed on tissue sections 5-6 ?m thick taken from paraffin blocks. With this method, the enzyme substrate AEC or DAB chromogens were administered by applying secondary antibodies with biotin to tissues incubated in moist environment with primary antibody and incubating with streptavidinated enzyme (peroxidase or alkaline phosphatase). A histoscore was created by taking the diffusiveness (0.1: <25%, 0.4: 26-50%, 0.6: 51-75%, 0.9: 76-100%) and severity(0: none, +0.5: very little, +1: little, +2: moderate, +3: severe) of immunoreactivity on staining as criteria. The formula histoscore = diffusiveness x severity was used in the calculations. The obtained data were analyzed by using statistical package program (SPSS, version 22.0) (Chicago, IL, USA). After Kolmogorov-Smirnov and Shapiro-Wilk normality tests were performed, independent sample t test was used in two-group variables and analysis of variance (ANOVA) was used in more than two groups of variables. p<0.05 value was considered statistically significant. In this study, there was no significant difference between the patient and control group in terms of demographic characteristics (p>0.05). The mean TRPM2 histoscore was found to be statistically significantly decreased in the LP patient group 0.26±0.09 compared to the control group 0.97±0.17(p<0.001). The mean GPX4 histoscore was statistically significantly decreased in the LP patient group 0.20±0.06 compared to the control group 0.97±0.17 (p<0.001). The mean SPX histoscore was found to be statistically significantly higher in the LP patient group 1.19±0.34 compared to the control group 0.38±0.06 (p<0.001). When evaluated in terms of gender and age distribution, there was no statistically significant difference between TRPM2, SPX and GPX4 histoscores in LP patients and control group (p>0.05) In conclusion, apoptosis has long been implicated in the pathogenesis of LP. With this study, we have shown that TRPM2 channels, ferroptosis and SPX may also be important factors in the pathogenesis of LP. In order to understand the place of these factors in pathogenesis more clearly, studies that need to be done at the molecular level are needed. Keywords: Lichen planus, transient receptor potential melastatin-2, glutathione peroxidase-4, spexin