PARAOKSONAZ ENZİMİNİN SAFLAŞTIRILARAK GRELİN HORMONUNA KARŞI KİNETİĞİNİN ARAŞTIRILMASI

Abstract

Bu çalışmada, metabolizma için büyük öneme sahip olan Paraoksonaz 1 (E.C. 3.1.1.2. ve E.C. 3.1.8.1.) enzimi, sığır karaciğerinden saflaştırılmaya çalışılmıştır. Bu amaçla homojenizasyon, ultrasantrifüj, % amonyum sülfat çöktürmesi, DEAE-Sefaroz iyon değişim kromatografisi ve Sefadeks G-200 jel filtrasyonu kromatografisi sırasıyla uygulanmıştır. Bu işlemler sonucunda Paraoksonaz 1 enzimi 23,93 U/mg protein spesifik aktivite ile homojenata göre 26,30 kat saflaştırılmıştır. Saflaştırılan Paraoksonaz 1 enziminin molekül ağırlığı SDS-PAGE ile 45,2 kDa olarak hesaplanmıştır. Paraoksonaz 1 enziminin pH:7,1 ve 37 0C'de optimum aktivite gösterdiği saptanmıştır. Substrat olarak fenil asetat kullanıldığında Km değeri 0,074 + 0,002 mM ve Vmax değeri 36,42 U/mg olarak hesaplanmıştır. Paraoksonaz 1 enziminin aktif grelin hormonuna etki ettiği ve aktif grelin hormonunu 20 dakika sonunda % 61,20 oranında inaktif greline dönüştürdüğü bulunmuştur.Anahtar Kelimeler : Paraoksonaz 1, saflaştırma, sığır karaciğeri, grelin, HPLC

In this study, enzyme paraoxonase I (E.C. 3.1.1.2. and E.C. 3.1.8.1.) that has major importance for metabolism is tried to be purified from bovine liver. For this purpose homogenization, ultracentrifugation, fractionation with ammonium sulphate precipitation, DEAE-Sepharose ion exchanger chromatography and Sephadex G-200 gel filtration chromatography was applied respectively. In the end of this process Paraoxonase 1 enzyme 23,93 U/mg protein specific activity has been 26,30 fold purified than the homogenate. Molecule weight of Paraoxonase 1 enzyme is measured as 45.2 kDa by SDS-PAGE. Optimum activity of Paraoxonase 1 enzyme has been observed at pH:7.1 and 37 0C. Phenyl acetate used as substrat, Km value was 0,074 + 0,002 mM and Vmax value was 36,42 U/mg. It is observed Paraoxonase 1 enzyme effects to ghrelin hormone and turns 61.20% of active ghrelin hormone to inactive ghrelin hormone in after 20 minutes.Key Words: Paraoxonase I, purification, bovine liver, ghrelin, HPLC