Taenia multiceps HSP70 Geninin Klonlanması, Ekspresyonu, Rekombinant Proteinin Karakterizasyonu ve Test Kiti Özelliğinin Araştırılması

Abstract

Taenia multiceps, erişkin formu köpek ve diğer etçillerin ince bağırsaklarında yaşayan taeniid bir sestoddur. Larvası, Coenurus cerebralis olarak bilinir ve koyun ve diğer ruminantların beyin ve medulla spinalisleri de içine alan sinir siteminde yerleşmektedir. Kistin varlığı tipik nörolojik semptomlara sebep olur ve vakaların çoğu hayvanların ölümüyle sonuçlanır. Coenurosis, yaygın olarak genç hayvanları etkilemesinden dolayı koyun çiftliklerinde önemli ekonomik kayıplara neden olabilir. Bu projenin amacı, koyunlarda T. multiceps HSP70 geni tarafından eksprese edilen proteinin koyun coenurosisi?nin erken tanısındaki etkinliğini belirlemek ve saha şartlarında uygulanabilir bir kit geliştirmektir. Bu amaçla, Taenia multiceps'in tam genom sekansından HSP70'i kodlayan geni çoğaltacak primerler dizayn edilmiş, enfekte bir koyundan alınan Coenurus cerebralis kistinden mRNA izolasyonu yapılıp takiben cDNA elde edilmiştir. Dizayn edilen primerlerle ilgili gen bölgesi çoğaltılmıştır. PZR ürününü klonlanıp eksprese edilmiş ve pürifiye edilen protein etkinliği bilinen pozitif koyun serumları kullanılarak Western blot ile gösterilmiştir. Ayrıca sahadan toplanan 1207 koyundan alınan serumlar ile rekombinant proteinin ELISA'daki etkinliğini belirlenmiştir. Bu işlemler neticesinde kesin pozitif ve negatif serumlar kullanılarak rekombinant TmHSP70 antijeninin sensitivite ve spesifite değerleri hesaplanmış ve WB analizinin spesifite sensivite değerleri %100 iken ELISA testinin spesifite ve sensivite değerleri sırasıyla %52.6 ve 66.6 olarak belirlenmiştir. Aynı zamanda bakısı yapılan 1207 serum örneğinin 567 (%46.97)?si pozitif olarak bulunmuştur. Bu araştırmada testler arasındaki ikili karşılaştırmalar sonucunda elde edilen doğruluk oranlarına bakıldığında, ELISA testinin sensivite ve spesifite değerlerinin WB testine kıyasla daha düşük olduğu görülmüştür. Sonuç olarak TmHSP70 proteininin koyunlarda coenurosisin erken tanısında ELISA temelli bir testte kullanılabileceği ancak çeşitli optimizasyonlara ihtiyaç duyulduğu belirlenmiştir.