Echinococcus granulosus’un Sığır ve Koyun İzolatlarındaki Antijen B (AgB) Gen Polimorfizminin Belirlenmesi ve Serolojik Tanı Üzerindeki Etkinliğinin Araştırılması

Abstract

Kistik Ekinokokkozis (KE), Echinococcus granulosus?un larval formu tarafından meydana getirilen hastalıktır. Antijen B (AgB), parazitin larval formu tarafından bol miktarda salgılanmakta ve KE'nin serolojik teshisi amacıyla antijen kaynagı olarak kullanılmaktadır. AgB, bir multigen ailesi tarafından kodlanmakta olup, konakçı immun sisteminden kaçma ile ilgili görevlerinin de oldugu ileri sürülmektedir. Bu tezin amacı; sıgır ve koyunlardan elde edilen E. granulosus'un farklı izolatları arasında genetik farklılıgı belirlemek ve AgB1 genindeki polimorfizmi PZR-RFLP ve DNA dizi analiziyle tespit ederek ELISA ve Western Blot testini kullanarak serolojik yanıtla olan iliskisini arastırmaktır. Bu amaçla; Elazıg ve Erzincan illerindeki mezbanelerde kesim sonrası, her bir ilden 30 sıgır ve 30 koyundan hidatik kistlere ait germinal membranlar ve bu hayvanlara ait kan serum örnekleri toplanmıstır. Total genomik DNA izolasyonundan sonra genetik karakterizasyon amacıyla tüm izolatların 12S rRNA geni PZR metoduyla çogaltılmıs, band elde edilemeyen örneklerin mt-CO1 gen bölgesi DNA sekans analiziyle incelenmistir. Daha sonra gDNA?lar AgB1 spesifik primerler kullanılarak PZR ile çogaltılmıs, RFLP yapılmıs ve DNA dizi analiziyle genetik varyasyon arastırılmıstır. Son asamada bütün serum örnekleri kısmi pürifiye kist sıvısı antijeni kullanılarak ELISA ve Western Blot testleri ile analiz edilmistir. Sonuç olarak; toplam 120 izolatın 114 (%95)?ünün 12S rRNA-PZR, 6 izolatın da mt-CO1-PZR ve takiben yapılan DNA dizi analizi neticesinde E. granulosus sensu stricto oldugu belirlenmistir. AgB1 için yapılan PZR-RFLP iyi sonuç vermedigi için yapılan DNA dizi analiziyle 120 örnegin 13 (%10.8)?ünde AgB1 geninde nükleotid degisimleri belirlenmistir. Bu çalısma ile DNA dizi analizi kullanılarak AgB1 geninde polimorfizm tespit edilen 13 hidatik kistli örnegin 9 (%69.2)?u ELISA ile 6 (%46.1)?sı da WB ile pozitif bulunmustur. Öte yandan AgB1 geninde herhangi bir polimorfizm saptanmayan 107 örnegin 80 (%74,7)?i ELISA ile 75 (%70,9)?i de WB ile pozitif bulunmustur. Sonuç olarak E. granulosus sensu stricto?nun AgB1 geninde degisik oranlarda varyasyon belirlenmis ve bunun serolojik yanıt üzerinde kısmi etkisinin oldugu tespit edilmistir.