GRAM NEGATİF NON FERMENTATİF BAKTERİLERDE METALLO-BETA-LAKTAMAZ ENZİMİNİN FARKLI YÖNTEMLERLE GÖSTERİLMESİ VE BU YÖNTEMLERİN KARŞILAŞTIRILMASI

Abstract

Non fermentatif Gram negatif (NFGN) basillerin son yıllarda giderek artan karbapenem direncinden sorumlu olabilecek yeni metallo-beta-laktamaz (MBL) enzimleri tanımlanmakta ve sayıları artarak dünya genelinde yayılma göstermektedir. Bu çalışmada, imipenem ve meropenem dirençli klinik izolatlarda MBL üretiminin yerini araştırmak ve ayrıca bu enzimlerin varlığını ortaya koyabilecek fenotipik yöntemleri test etmek ve karşılaştırmak amaçlanmıştır.Çalışmaya alınan bakterilerin tanımlanması standart klinik mikrobiyolojik yöntemlerle yapılmış ve BD Phoenix tam otomatize identifikasyon sisteminde değerlendirilmiştir. Bakterilerin invitro koşullarda antibiyotiklere direnç durumları CLSI önerileri doğrultusunda disk difüzyon yöntemi ile belirlenmiş, BD Phoenix tam otomatize identifikasyon cihazı ile doğrulanmıştır. MBL üretimi kombine disk yöntemi, çift disk sinerji, modifıye Hodge testi ve E test yöntemleri ile araştırılmıştır.Meropenem dirençli Acinetobacter kökenlerinde MBL üretimi kombine disk metodu ile % 95, MP-EDTA çift disk sinerji testi ile % 67.5, modifıye Hodge testi ile % 72.5, E test ile % 97.5; meropeneme dirençli Pseudomonas kökenlerinde kombine disk metodu ile %80, MP-EDTA çift disk sinerji testi ile % 100, Modifiye Hodge testi ile % 60 ve E test ile % 60 oranında bulunmuştur.Metallo-beta-laktamaz üreten bakterilerin aztreonam ve colistin dışında tüm beta laktamlara dirençli olmaları ve klinik uygulamada uygun bir MBL inhibitörünün bulunmaması, ayrıca MBL ile aminoglikozid direnç genlerinin genetik olarak birarada bulunması epidemiyolojik açıdan MBL varlığının tespit edilmesini çok önemli kılmaktadır. MBL araştırılmasında hızlı, basit, duyarlılık ve özgüllüğü yüksek olan iyi bir fenotipik tarama yöntemine gerek vardır.Günümüzde var olan tarama yöntemlerinin hiçbiri yeterli değildir. Bu sebeple tarama sonuçlarının moleküler yöntemlerle doğrulanması gereklidir. Yaptığımız çalışma sonunda, hastanemizde MBL üreten suşların belirlenmesi ve kontrolü ile ilgili olarak daha ileri araştırmaların yapılması gerektiği düşüncesi ortaya çıkmıştır.Anahtar Kelimeler: MBL üretimi, Pseudomonas, Acinetobacter, fenotipik yöntemler.New metallo-beta-lactamase (MBL) enzymes are identified in recent years that may be responsible for the increased number of non fermentative Gram negative(NFGN) bacilli's growing carbapenem resistance and they spread throughout the world. In this study, we aimed to investigate the production of MBL at clinicalisolates resistant to imipenem and meropenem, to test and compare phenotypicmethods that reveals the presence of these enzymes. The identification of bacteria was made with standard clinical microbiological methods and confirmed in the BD Phoenix fully automatic identification system. In vitro bacteria resistance to antibiotics determined by using disk method in accordance with CLSI recommendations and confirmed with the BD Phoenix fully automated identification device. Production of MBL were evaluated by combined disc method, double-disk synergy test, modified Hodge test and E test methods. Metallo-beta-lactamase production at meropenem resistant Acinetobacterstrains were found 95% with the combined disc method, 67.5% with MP-EDTA double-disk synergy test, 72.5% with the modified Hodge test and 97.5% with E test; at meropenem resistant Pseudomonas strains 80% with the combined disk method, 100% with MP-EDTA double-disk synergy test, the modified Hodge test and the E test with 60% and 50% respectively. Metallo-beta-lactamase producing bacteria are being resistant to all beta lactams except aztreonam and colistin, in clinical practice the lack of a suitableinhibitor for MBL, as well as presence of MBL genes together with theaminoglycoside resistance genes in genetic with epidemiologic aspect makes it very important to determine the presence of MBL. For the investigation of MBL a fast, simple, with high sensitivity and specificity good phenotypic screening method is needed. None of the screeningmethods at present are sufficient. Therefore, the molecular methods are needed to viiconfirm the screening results. Our study suggests that further research needs to be done in our hospital for identification and control of MBL producing strains. Keywords: MBL production, Pseudomonas, Acinetobacter, phenotypic methods.