Sığır vebası virüsü RBOK aşı suşu matriks geninin polimeraz zincir reaksiyonu ile çoğaltılması ve $TOPO^R$ XL klonlama vektörünü yerleştirilmesi

Abstract

Bu çalışmada sığır vebası virüsü (RPV) RBOK aşı susu matriks (M) geni polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile çoğaltıldı ve TOPO® XL klonlama vektöründe klonlandı. Bu amaçla Vero hücreleri RPV aşı susu ile infekte edilerek toplam RNA'lar elde edildi. Toplam RNA'lardan tersine transkripsiyonla M geni kopya DNA'ları (cDNA) çoğaltıldı. Matriks genine özgü primerler kullanılarak cDNA'lardan çoğaltılan M geni TOPO® XL klonlama vektörüne direkt yerleştirildi ve bu rekombinant DNA kompetan Escherichia coli (E. coli) JM109 hücrelerine transforme edildi. Rekombinant plazmid pTOPO XL'de M geninin bulunup bulunmadığını anlamak için, hem PZR tarama hem de enzim kesim deneyleri uygulandı.