İDİYOPATİK PULMONER ARTERİYEL HİPERTANSİYON ETİYOLOJİSİNDE TRPM6 GENİNDE RS2274924 VE RS3750425 POLİMORFİZMLERİNİN ARAŞTIRILMASI

Abstract

İdiyopatik pulmoner arteriyel hipertansiyon (İPAH) sebebi net bilinmeyen vasküler direncin artmasına bağlı pulmoner hipertansiyon olgusunun bir alt grubudur. Magnezyumun insan vücudunda vasküler yeniden şekillenmede, kan basıncı düzenlenmesinde ve hipertansiyonda aktif rol aldığı gösterilmiştir. Yapılan çalışmalarda Geçici reseptör potansiyel melastatin 6 (TRPM6)'nın iyon kanalının magnezyum (Mg+2) iyonuna duyarlı olduğu, akciğer ve endotel hücrelerde ifade edildiği ve hipomagnezemi ile ilişkili olduğu tespit edilmiştir. Literatür taraması sonucu TRPM6 geninin rs2274924 ve rs3750425 varyantlarının Mg+2 ile ilişkili olduğunu gösteren pek çok çalışma bulunması sebebiyle bu iki varyant seçilmiştir. Bu bağlamda mevcut çalışmada İPAH hastalarında TRPM6 geninin rs2274924 ve rs3750425 varyantlarının ve promoter metilasyon düzeylerinin sağlıklı bir kontrol grubu ile karşılaştırılarak analiz edilmesi amaçlanmıştır. Anahtar kelimeler: Pulmoner hipertansiyon, TRPM6, İPAH, polimorfizm Bu amaç doğrultusunda çalışmamız Fırat Üniversitesi Tıp Fakültesi Kardiyoloji kliniğinden elde ettiğimiz 198 kişilik İPAH tanısı alan hasta grubu ve 198 kişilik sağlıklı kontrol grubu ile yürütülmüştür. Tıbbi Biyoloji bölümü laboratuvarlarımızda hasta ve kontrol grubundan alınan kan örneklerinden DNA izolasyonu yapılarak Real-time PCR Taq –Man genotipleme yöntemi kullanılarak TRPM6 genindeki ilgili polimorfizmler analiz edilmiştir. TRPM6 gen promoter metilasyon analizi DNA'nın bisülfit modifikasyonu sonrası metilasyon spesifik primerlerin varlığında kantitatif qRT-PCR analizi ile saptanmıştır. rs2274924 genotip dağılımları ve allel frekansları açısından gruplar arasında anlamlı bir sonuç görülmemiştir (p>0.05). rs3750425 genotip dağılımları açısından CT heterozigot genotipinin hasta grubunda %40 oranında ve kontrol grubunda %28 oranında görüldüğü ve istatistiki olarak anlamlı düzeyde CT heterozigot genotipinin hasta grubunda attığı belirlenmiştir (p=0.036). Ancak bu anlamlılık düzeyine allel frekansları açısından sınırda bir anlamlılık değeri (p=0.073) elde edilmekle beraber ulaşılamamıştır. Hasta alt grupları genotip dağılımları açısından incelendiğinde rs3750425 alleli için İPAH grubu ile kontrol grubu arasında anlamlı farklılık vardır (p=0.030). Metilasyon analizi sonucunda hasta ve kontrol grupları arasında metilasyon açısından anlamlı bir farklılık elde edilememiştir. Haplotip analizi sonucunda ise rs2274924/rs3750425 haplotipleri açısından genotip bulgularımızı destekler şekilde TT/CT haplotipinin hasta grubunda ciddi oranda arttığı tespit edilmiştir. Mevcut çalışmada TRPM6 geninin rs2274924 polimorfizmi ile İPAH arasındaki ilişkiyi destekleyen kanıt elde edilememesine rağmen, rs3750425 polimorfizmi CT genotipinin İPAH'a yatkınlık açısından bir risk faktörü olabileceğini destekleyen ilk kanıtlar elde edilmiştir. Bu durum belirtilen varyantın İPAH riski açısından Mg+2 alımıyla ilişkili olarak değişebileceğini düşündürmektedir. Bu sonuçları doğrulamak ve TRPM6 geninin rs3750425 varyantının İPAH ve Mg+2 ilişkisi açısından anlaşılması için daha fazla sayıda çalışmaya gereksinim vardır. Anahtar kelimeler: Pulmoner hipertansiyon, TRPM6, İPAH, polimorfizmIdiopathic pulmonary arterial hypertension (IPAH) is a subgroup of pulmonary hypertension due to increased vascular resistance of unknown origin. Magnesium has been shown to play an active role in vascular remodeling, blood pressure regulation and hypertension in the human body. Studies have shown that the ion channel of Transient receptor potential melastatin 6 (TRPM6) is sensitive to magnesium (Mg+2) ion, is expressed in lung and endothelial cells and is associated with hypomagnesemia. As a result of the literature review, these two variants were selected because there are many studies showing that rs2274924 and rs3750425 variants of TRPM6 gene are associated with Mg+2. In this context, the present study aimed to analyze the rs2274924 and rs3750425 variants of TRPM6 gene and promoter methylation levels in IPAH patients compared to a healthy control group. In line with this purpose, our study was conducted with 198 patients diagnosed with IPAH and 198 healthy control subjects obtained from the Cardiology Clinic of Fırat University Faculty of Medicine. DNA was isolated from the blood samples obtained from the patient and control groups in our Medical Biology department laboratories and the related polymorphisms in TRPM6 gene were analyzed using Real-time PCR Taq -Man genotyping method. TRPM6 gene promoter methylation analysis was determined by quantitative qRT-PCR analysis in the presence of methylation specific primers after bisulfite modification of DNA. In terms of rs2274924 genotype distributions and allele frequencies, no significant result was observed between the groups (p>0.05). In terms of rs3750425 genotype distributions, CT heterozygous genotype was observed in 40% of the patient group and 28% of the control group and CT heterozygous genotype was statistically significant in the patient group (p=0.036). However, this significance level could not be reached although a borderline significance value (p=0.073) was obtained in terms of allele frequencies. When the patient subgroups were analyzed in terms of genotype distributions, there was a significant difference between the IPAH group and the control group for the rs3750425 allele (p=0.03). Methylation analysis revealed no significant difference between the patient and control groups in terms of methylation. As a result of haplotype analysis, it was found that TT/CT haplotype increased significantly in the patient group in support of our genotype findings in terms of rs2274924/rs3750425 haplotypes. Although no evidence supporting an association between the rs2274924 polymorphism of the TRPM6 gene and IPAH was obtained in the present study, preliminary evidence supporting that the CT genotype of the rs3750425 polymorphism may be a risk factor for predisposition to IPAH was obtained. This suggests that the variant may be altered in relation to Mg+2 intake in terms of IPAH risk. Further studies are needed to confirm these results and to understand the rs3750425 variant of the TRPM6 gene in relation to IPAH and Mg+2. Key Words: Pulmonary hypertension, TRPM6, IPAH, polymorphism