Hepatit B virüsü HBcAg geninin klonlanması ve ökaryotik hücrelerde ekspresyonu

Abstract

Bu çalışmada, Hepatit B virüsünün kor antijeni (HBcAg) geninin genetik klonlanması ve ökaryotik hücrelerde ekspresyonu rapor edilmektedir. Bu amaçla ilk olarak, önceki çalışmalarımızda pUC19 plazmidine yerleştirilmiş olan HBcAg geni, bu rekombinant plazmit klonlarmdan EcoRI ve Hind\\\\\\ restriksiyon enzimleriyle uzaklaştırılmıştır. Daha sonra, elde edilen HBcAg geni, ökaryotik ekspresyon plazmidi olan pcDNA3 içine yerleştirilmiştir. Oluşturulan rekombinant plazmit (pcDNA-HBc) ökaryotik Vero hücrelerine transfekte edilmiş ve plazmidini istikrarlı bir şekilde taşıyan hücre dizileri (Vero-HBc), genetisin içeren kültür vasatında seçilmiştir. Vero-HBc hücrelerinde HBcAg geninin varlığı polimeraz zincir reaksiyonu ile doğrulanmıştır. Vero-HBc hücrelerinde HBcAg proteinin ekspresyonu Western lmmunoblot deneyi ile test edilmiş ve bu yöntemle Vero-HBc hücrelerinde 21 kilodalton (kDa) büyüklüğünde HBcAg proteini belirlenmiştir.