NESFATİN-1'İN SIÇAN DUYUSAL NÖRONLARINDA KALSİYUM SİNYALLEŞMESİ ÜZERİNE ETKİSİ

Abstract

Nesfatin-1; son yıllarda keşfedilen, nükleobindin 2 (NUCB2) 'nin postranslasyonel işlenmesinden elde edilen anoreksijenik hipotalamik bir polipeptittir. Birçok çalışma nesfatin-1'in, enerji metabolizmasına ek olarak ağrı sinyalleri de dahil olmak üzere somatosensorial ve visseral transmisyonda rol aldığını göstermektedir. Bu çalışmanın amacı; neonatal sıçanların kültüre edilmiş dorsal kök gangliyon nöronlarında (DKG) nesfatin-1 'in intrasellüler kalsiyum seviyeleri ([Ca+2]i) üzerine etkilerini araştırarak, periferal nöronal sinyallerin iletiminde olası rolünü keşfetmektir. Nesfatin-1'in DKG nöronlarında [Ca+2]i üzerine etkileri in vitro kalsiyum görüntüleme sistemi kullanılarak araştırıldı. DKG nöronları; 1-2 günlük neonatal Wistar sıçanlarından alınan ganglionların enzimatik ve mekanik ayrıştırma işlemini takiben primer kültürde yetiştirildi. Bu tez çalışması ile fura-2 bazlı kalsiyum görüntüleme sistemi tekniği kullanılarak, nesfatin-1 'in [Ca+2]i üzerine etkileri ve protein kinaz C (PKC) aracılı yolağının rolü incelendi. Nesfatin-1 kültüre DKG nöronlarında [Ca+2]i'i artırdı. Hücreler nesfatin-1 uygulaması öncesinde pertussis toksin ile muamele edildiğinde [Ca+2]i meydana gelen artış ortadan kalktı. Protein kinaz C inhibitörü chelerythrine chloride, nesfatin-1 ile indüklenmiş [Ca+2]i daki artışı baskılamıştır. Bu tez çalışmasının sonuçları; nesfatin-1'in kültüre edilmiş DKG nöronlarında protein kinaz C aktivasyonuna bağlı olarak, G-protein bağlantılı reseptör ile etkileştiğini ve bu sayede [Ca+2]i artışına sebep olduğunu göstermektedir.

Nesfatin-1 is a recently identified anorexigenic hypothalamic polypeptide derived from the posttranslational processing of nucleobindin 2 (NUCB2). Several studies have indicated that this neuropeptide may be participated in somatosensory and visceral transmission including pain signals in addition to energy metabolism. The aim of this study was to explore the possible role of nesfatin-1 in the transmission of peripheral neural signals by investigating the effects of nesfatin-1 on intracellular free calcium levels ([Ca2+]i) in cultured neonatal rat dorsal root ganglion (DKG) neurones. The effects of nesfatin-1 on [Ca2+]i in DKG neurons were investigated by using an in vitro calcium imaging system. DKG neurons were grown in primary culture following enzymatic and mechanical dissociation of ganglia from 1-or 2-day-old neonatal Wistar rats. Using the fura-2-based calcium imaging technique, the effects of nesfatin-1 on [Ca2+]i and role of the protein kinase C (PKC)-mediated pathway in nesfatin-1 effect were assessed. Nesfatin-1 elevated [Ca2+]i in cultured DKG neurons. The response was prevented by pretreating the cells with pertussis toxin. The protein kinase C inhibitor chelerythrine chloride suppressed nesfatin-1-induced rise in [Ca2+]i. The result shows that nesfatin-1interacts with a G protein-coupled receptor, leading to an increase of [Ca2+]i, which is linked to protein kinase C activation in cultured rat DKG neurons.