DENEYSEL ALT EKSTREMITE ISKEMI REPERFÜZYON MODELINDE APOSININ'IN ISKELET KASI ÜZERINE KORUYUCU ETKILERININ ARAŞTIRILMASI

Abstract

Deneysel çalışmalarda iskemi/reperfüzyon (I/R) hasarının önlenmesi amacıyla birçok ajan ile başarılı sonuçlar alınsa da bunların çok az kısmı klinik olarak kullanılmıştır. Bu çalışmada deneysel alt extremite I/R hasarında, aposininin doku malondialdehit (MDA), apoptozis ve Transient Reseptör Potansiyel Melastatin 2 (TRPM2) üzerine etkileri incelenmiştir. Çalışmada, 30 adet 8-10 haftalık dişi Sprague Dawley rat kullanıldı. Deney hayvanları her grupta 6 hayvan olacak biçimde 5 gruba ayrıldı. Kontrol grubuna deney süresince herhangi bir uygulama yapılmadı. Sham grubuna sadece laparatomi yapıldı. I/R grubuna infrarenal abdominal aorta klemp koyularak 2 saat iskemi, 2 saat reperfüzyon uygulandı. Aposinin-iskemi-reperfüzyon grubuna (A-I/R) I/R öncesi 20 mg/kg dozunda aposinin intravenöz (iv) uygulandı. İskemi-aposinin-reperfüzyon (IAR) grubuna iskemi yapılıp reperfüzyondan yarım saat önce 20 mg/kg dozunda aposinin iv olarak uygulandı. Deney sonunda anestezi altında ratların soleus kasları çıkartılıp dekapite edildi. Bloklardan alınan kesitlere apoptotik hücrelerin belirlenmesi için TUNEL (TdT-Mediated Nick and Labeling Technique), TRPM2 immünreaktivitesi için avidin-biotin-peroksidaz yöntemi ve histopatolojik inceleme için ise masson trikrom boyama tekniği uygulandı. Çalışmamızda kontrol ve sham grupları bulguları benzerdi. Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında I/R grubunda belirgin histopatolojik değişiklikler ile birlikte apoptozis artmış iken TRPM2 ve MDA seviyesi azalmıştı. I/R grubu ile karşılaştırıldığında A-I/R grubunda histopatolojik değişiklikler ve apoptozisde belirgin iyileşme izlenmekle beraber, MDA seviyesi artmış, TRPM2 immünreaktivitesi ise azalmıştı. IAR grubu ise I/R grubuna benzerdi. Sonuç olarak, I/R öncesi uygulanan aposininin I/R hasarında TRPM2 immünreaktivitesi ve histopatolojik değişiklikleri belirgin olarak azaltığı ve klinik kullanımı için daha kapsamlı deneysel çalışmalara gereksinim olduğu kanaatine varılmıştır. Anahtar Kelimeler: İskemi/Reperfüzyon Hasarı, MDA, TRPM2, Apoptozis, AposininAlthough successful results were obtained with many agents for prevention of ischemia-reperfusion (I/R) injury in experimental studies, only a small part of them were used clinically. In this study, it was aimed to investigate the influences of apocynin on tissue malondialdehyde (MDA), apoptozis and Transient Receptor Potential Melastatin 2 (TRPM2) in experimental lower extremity I/R injury. Thirty female Sprague Dawley rats aged 8-10 weeks were used in the study. Test animals were allocated to 5 groups with 6 animals in each. Infrarenal abdominal aorta clamping was done in I/R group and 2 hours ischemia and 2 hours reperfusion was applied. In apocynin-ischemia-reperfusion group (A-I/R), ischemia was created and 20 mg/kg of apocynin was administered via intravenous (iv) route 30 min before reperfusion. At the end of the test, soleus muscles were removed and the rats were decapited. TUNEL (TdT- Mediated Nick and Labeling Technique) was applied for determining apoptotic cells, avidin-biotin-peroxidase method was applied for TRPM2 immunoreactivity and mason trichrome stain was applied for histopathologic examination. Results of control and sham groups were similar. When compared with control group, while apoptozis increased together with significant histopathologic changes, TRPM2 and MDA levels decreased in I/R group. When compared with I/R group, although significant improvement was observed in histopathologic changes and apoptozis, MDA level increased, TRPM2 immunoreactivity decreased in A-I/R group. IAR group was similar with I/R group. In conclusion, it was considered that apocynin applied before I/R significantly reduced TRPM2 immunoreactivity and histopathologic changes in I/R injury and more comprehensive studies are required for its clinical use. Key words: ischemia-reperfusion injury, MDA, TRPM2, apoptozis, apocynin