KARBON TETRAKLORÜR (CCL4) İLE KARACİĞER HASARI OLUŞTURULMUŞ RATLARDA DEVE DİKENİ (SİLYBUM MARİANUM L.)'NİN KASPAZ-3, KASPAZ-9, BAX, BCL-2 PROTEİNLERİNİN EKSPRESYONU VE DNA HASARI ÜZERİNE ETKİSİ

Abstract

Deve dikeni (DD), özellikle karaciğer üzerinde koruyucu etkileri olan güçlü bir antioksidan bitkidir. İçme suyu yoluyla alınan deve dikeninin, karbon tetraklorür (CCl4) ile karaciğer hasarına uğratılmış ratlar üzerindeki etkilerini araştırdığımız bu tez çalışmasında, 28 adet erkek Wistar albino rat kullanıldı. Gruplar 4'e bölündü ve her grupta 7'şer rat yer aldı. CCl4 ve CCl4+DD gruplarındaki ratlara dört hafta boyunca haftada iki kez intraperitoneal (karın zarı içine) olarak CCl4 (2 ml/kg canlı ağırlığı [CA]) enjekte edilmiştir. Ratların tümü standart diyetle beslendi. NK ve CCl4 gruplarına normal içme suyu; PK ve CCl4+DD gruplarına ise kaynatılmış % 10'luk deve dikeni ekstraktı ilave edilen içme suyu verildi. 4 hafta sonra ratlar dekapite edilerek karaciğer dokuları incelendi. Karaciğer dokusunda bax, bcl-2, kaspaz-3, kaspaz-9 protein ekspresyon düzeylerini Western blotlama tekniğiyle belirledik. Karaciğer dokusundaki DNA hasarını DNA agaroz jel elektroforezi ile tespit ettik. Karaciğer dokusunda meydana gelen lipit peroksidasyonunu MDA (malondialdehit) analizleriyle belirledik. Deve dikeni uygulaması, CCl4+DD grubunda, CCl4 grubuna göre bax, bcl-2, kaspaz-3, kaspaz-9 protein ekspresyonları bakımından anlamlı bir fark oluşturdu (p<0.05). Deve dikeni uygulamasıyla kaspaz-3 ve kaspaz-9 protein ekspresyon düzeyleri artış gösterirken, bax ve bcl-2 protein ekspresyon düzeyleri azalış gösterdi. TUNEL metodu incelemelerinde, CCl4+DD grubunda CCl4 grubuna göre apoptotik indeks oranının daha düşük olduğu gözlendi. Deve dikeni uygulaması, CCl4+DD grubunda, CCl4 grubuna göre DNA hasarı düzeyi bakımından azalış gösterdi. Bu sonuçlar, deve dikeninin Wistar albino ratlarda karaciğer hasar oranını azalttığını göstermektedir ve bu bulgular, deve dikeni uygulamasının insanlarda da karaciğer hasarını önleyici etkisini araştırmada yol gösterici olabilecektir.Thistle is a strong antioxidant plant having protecting effect particularly on the liver. 28 male Wistar albino rats were used in this thesis study that we investigated the effects of milk thistle taken via drink water on rats modified with liver damage by carbon tetrachloride (CCl4). Groups were divided into four, and 7 rats involved in each group. CCl4 (2 ml/kg body weight) has been injected to the rats in groups of CCl4 and CCl4+T, intraperitoneally twice weekly for four weeks. All rats were fed a standard diet. Drinking water were given to NC and CCl4 groups; and boiled 10 % thistle extract added drinking water were given to PC and CCl4+T groups. After 4 weeks, the rats were decapitated and the liver tissues were examined. Hepatic tissue bax, bcl-2, caspase-3, caspase-9 protein expression levels were determined by Western blotting techniques. DNA damage in the liver was determined by DNA agarose gel electrophoresis. Lipid peroxidation occurring in liver tissue were determined by MDA analysis. Thistle application, in CCl4+T group, compared to CCl4 group, bax, bcl-2, caspase-3, caspase-9 protein expression creates a significant difference (p<0.05). Caspase-3 and caspase-9 protein expression levels increased, but bax and bcl-2 protein expression levels were decreased through the application of thistles. The rate of apoptotic index was observed higher in CCl4+T group than CCl4 group at Tunel assay examinations. Thistle application, showed a decrease at CCl4+T group compared to CCl4 group in terms of the level of DNA damage. These results shows that thistle reduce the rate of liver damage at Wistar albino rats and these findings will be guiding in research of inhibitory effect of liver damage of humans like rats.