POLİKLORLU BİFENİLLER VE PESTİSİTLERİN İNSAN LENFOSİT KÜLTÜRÜNDE İMMÜNOFENOTİP VE TH1/TH2 POLARİZASYONUNA ETKİLERİ

Abstract

Pestisitler tarımda zararlılarla savaşmak, poliklorlu bifeniller (PCB' ler) ise endüstriyel kullanım amacıyla üretilmişlerdir. PCB ve pestisitlerin biyoakümülatif özellikte oldukları bilinmektedir. Bu bileşenlerin nörotoksik, kanserojenik, immün sistem baskılayıcı ve endokrin bozucu etkileri olduğu farklı çalışmalarda gösterilmiştir. Bu tez çalışmasının amacı, PCB 52, PCB 77, endosulfan ve kloropirifosun insan lenfosit hücre kültüründe; Th1/Th2 polarizasyonuna ve immüno fenotip üzerine olan etkilerini incelemekti. Bu çalışmada, izole edilen insan lenfositleri 8 gönüllünün venöz kan örneklerinden hazırlandı. Kan örnekleri alınarak lenfosit izolasyonu gerçekleştirildi ve hücre kültür plaklarına aynı yoğunlukta ekim yapıldı. Hazırlanan dört ayrı lenfosit hücre kültürüne sırasıyla PCB 52 (0.1?l), PCB 77 (1?l), endosulfan (1?l) ve kloropirifos (10?l) uygulandı. Bu deneyler konkanavalinA (KonA) içeren ve içermeyen medyumda ayrı ayrı tekrar edildi. PCB ve pestisit uygulamasından sonra 24 ve 48 saatin sonunda 0.3 mL supernatant alınd. ELISA yöntemiyle IL-13, IFN-? ve TGF-? seviyelerindeki değişiklikler tespit edildi. Deneylerin sonunda tüm kuyucuklardaki lenfositler tekrar besi ile muamele edildi ve yüzey immünofenotip yüzey belirteçleri flow sitometri ile belirlendi. PCB' ler Th1 ve B hücrelerinde CD23, CD4+25 ve TGF-? ekspresyonu seviyelerinde anlamlı bir artışa sebep oldu. Pestistlerin özellikle de kloropirifosun lenfosit hücre kültüründe CD4+CD30 seviyesinde artışa sebep oldu. Th2 polarizasyonunu baskılayıcı etkisi gözlendi. Sonuçlarımız, PCB' lerin immün cevabı Th1 yönünde, pestisitlerin ise Th2 yönünde değiştirebileceğini göstermektedir.Pesticids were being produced against pestilents in agriculture sector, while polichlorinated bipheyls (PCBs) were produced for industrial purposes. PCBs and pesticids have been to have known bioaccumulative properties.It was shown that, PCBs and pesticids have neurotoxicity, carcinogenicity,immune system suppression and endocrine disruption effects in various studies.The aim of this thesis study was to investigate the action of PCB 52, PCB 77 and endosulphan, chlorpyrifos on Th1/Th2 polarization and immuno phenotype in human lymphocytes cultures. In this study, isolated human lymphocytes were prepared from venous blood sample from eight volunteers. And then lymphocyte isolation was performed and plantation having same density was made to the cellular culture plates. PCB 52 (0,1 µl), PCB 77 (1 µl), endosulphan (1 µl) and chloropirifus (10 µl) were applied to four different lymphocyte cellular culture, respectively. The experiments was done separately both with and without Concanavalin A (ConA) medium. Supernatant with 0,3 mL was taken in the end of 24 and 48 hours after application PCBs and pesticids. And then we measured in levels of IL-13, IFN-? and TGF-? by ELISA method. At the end of these experiment, lymphocytes in all well plate were applied by repeatitive feeding and immuno phenotype was detected by flow cytometry. PCBs caused a significant increase in expression of CD23, CD4+25 and TGF-? on Th1 and B cells. Pesticids, especially chloropirifus, caused an increase in levels of CD4+CD30+ at lymphocytes cell cultures. Chloropirifu caused increase in level of IFN-? while suppression effects in Th2 polarization. Our results showed that PCBs and pesticides may lead to change immune system response towards Th1 and Th2, respectively.