METABOLİK MÜHENDİSLİĞİ YAKLAŞIMI İLE LİKOPENİN MİKROBİYAL BİYOSENTEZİ

Abstract

Bu tez çalışmasında likopenin Escherichia coli bakterisinde metabolik mühendisliği yaklaşımı ile mikrobiyal üretimi amaçlanmıştır. Likopenin E. coli'de mikrobiyal üretimi için Gibson assembly metodu kullanılarak likopen sentezini gerçekleştiren enzimlerin anlatımını sağlayan genleri (crtEBI) içeren plazmidin (pAC-EHER-EBIidi) inşası gerçekleştirilmiştir. İnşa edilen plazmid farklı E. coli suşlarına (E. coli MG1655, E. coli NEB 10-beta, E. coli DH5?, E. coli DH5?-Pro, E. coli NEB-Turbo, E. coli XL1-Blue, E. coli TOP10, E. coli EPI300, E. coli DE3) aktarılmıştır ve plazmid aktarılan bu suşların sıvı kültürleri hazırlanmıştır. Hazırlanan sıvı kültürlerden zamana bağlı likopen üretimi 24 saatte bir asetonla likopen ekstraksiyonu ve ekstraksiyon ürünlerinin Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) ile analizi yapılarak gerçekleştirilmiştirIn this thesis, microbial production of lycopene in Escherichia coli bacteria by metabolic engineering approach was aimed. For the microbial production of lycopene in E. coli, the plasmid (pAC-EHER-EBIidi) containing the expression of the enzymes that carry out the synthesis of lycopene using the Gibson assembly method (crtEBI) was carried out. The plasmid that was constructed had different E. coli strains (E. coli MG1655, E. coli NEB 10-beta, E. coli DH5?, E. coli DH5?-Pro, E. coli NEB-Turbo, E. coli XL1-Blue, E. coli TOP10, E. coli EPI300, E. coli DE3) was transferred and the liquid cultures of these strains transferred to the plasmid were prepared. The lycopene production from the prepared liquid cultures was carried out by means of acetople extraction with acetone and analysis of the extraction products by High Pressure Liquid Chromatography (HPLC)