DENEYSEL DİYABETİK SIÇAN TESTİS DOKUSUNDA İRİSİN VE APOPTOZİS ÜZERİNE VİTAMİN D'NİN ETKİLERİNİN İNCELENMESİ

Abstract

Diyabet dünyada insidansı gün geçtikçe artan ve testisler dahil tüm biyolojik dokuları etkileyen önemli bir hastalıktır. Bu çalışmada deneysel olarak diyabet oluşturulan sıçanların testis dokularında histolojik ve biyokimyasal olarak irisin, apoptozis, total antioksidan seviye (TAS) ve total oksidan seviye (TOS) değerleri üzerine vitamin D'nin etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. Ağırlıkları 200-220 g arasında değişen, 8-10 haftalık Wistar ırkı 41 adet erkek sıçan 5 gruba ayrıldı. Birinci gruptaki (Kontrol grubu) 7 hayvana herhangi bir uygulama yapılmadı. İkinci gruptaki (Sitrat buffer grubu) 7 hayvana tek doz 0.1 Molar (M) sodyum sitrat tamponu periton içi (i.p) uygulandı. Üçüncü gruptaki (Vitamin D grubu) 7 hayvana, 50 IU/gün oral yolla vitamin D verildi. Dördüncü gruptaki (Diyabet grubu) 10 hayvana tek doz 50 mg/kg Streptozotosin (STZ) 0.1 M sodyum sitrat tamponunda çözdürülüp i.p verildi. Beşinci gruptaki (Diyabet+vitamin D grubu) 10 hayvana, tek doz 50 mg/kg STZ, 0.1 M sodyum sitrat tamponunda çözdürülüp i.p verildikten ve diyabet oluşturulduktan sonra 50 IU/gün oral yolla vitamin D verildi. Yetmişiki saat sonra kuyruk veninden kan alındı ve kan glikoz düzeyi 250 mg/dl üzerinde olan sıçanlar diyabetik olarak kabul edildi. Sekiz hafta sonra tüm sıçanların kuyruk veninden kan alındıktan sonra sıçanlar sakrifiye edildi ve testis dokuları alındı. Alınan testis dokuları histopatolojik olarak, immünohistokimyasal olarak ve TUNEL metodu ile incelendi. Kan serumundaki ve testis doku süpernatantlarındaki irisin düzeyi Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) yöntemi ile analiz edildi. TAS ve TOS sonuçları ise REL yöntemi kullanılarak değerlendirildi. Histolojik incelemede, diyabet grubundaki sıçanların testislerinde, seminifer tubullerdeki spermatogenik seri hücrelerde azalma en önemli bulgu olarak görülürken, vitamin D'nin bu durumu önemli ölçüde önlediği görüldü. İmmünohistokimyasal incelemede, diyabet grubundaki irisin düzeyinin kontrol grubuna oranla azaldığı, vitamin D uygulamasının ise irisin düzeyini arttırdığı gözlemlendi. Apoptotik hücre sayıları kıyaslandığında ise diyabet grubundaki apoptotik hücrelerin kontrol grubuna oranla arttığı, vitamin D uygulamasının ise apoptotik hücre sayısını azalttığı gözlemlendi. Biyokimyasal analizlerde, diyabet grubunda doku ve serum irisin düzeyleri ve TAS düzeyleri azalırken, TOS düzeyinin arttığı görüldü. Diyabet+vitamin D grubunda ise diyabet grubu ile kıyaslandığında, doku ve serum irisin düzeyleri ve TAS düzeyleri artarken, TOS düzeyinin azaldığı tespit edildi. Vitamin D grubunda ise diyabet+vitamin D grubuna benzer sonuç gözlemlendi. Sonuç olarak vitamin D uygulamasının diyabetin testis üzerindeki olumsuz etkilerini önemli ölçüde ortadan kaldırdığını ve diyabetin tedavisine katkı sağlayabileceği düşünülmektedir. Anahtar Kelimeler: Diyabet, Testis, İrisin, Vitamin D, Apoptozis.Diabetes is an important disease in the world that has been increasing day by day and affecting all biological tissues including testes. The aim of this study was to investigate the effects of vitamin D on testicular tissue histologically and biochemically on irisin, apoptosis, total antioxidant status (TAS) and total oxidant status (TOS). 41 male rats were divided into 5 groups. 7 animals were not treated in the first group (Control group). A single dose of 0.1 Molar (M) sodium citrate buffer was administered intraperitoneally (i.p) to 7 animals in the second group (Citrate buffer group). In the third group (Vitamin D group) 7 animals were given vitamin D 50 IU/day. 10 animals in the fourth group (Diabetes group) were given a single dose of 50 mg/kg Streptozotocin (STZ) in 0.1 M sodium citrate buffer to give i.p. 10 animals in the fifth group (Diabetes+vitamin D group) were given 50 mg/kg STZ, 0.1 M sodium citrate buffer in a single dose and given i.p. Seventy two hours later blood was collected from the tail vein and the blood glucose levels above 250 mg/dl were considered diabetic. After eight weeks, the rats were sacrificed and the testicular tissues were removed after the blood is taken from the tail vein of all rats. Testis tissues were examined histopathologically, immunohistochemically and by TUNEL method. The level of irisin in blood serum and testis tissue supernatants was analyzed by Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) method. TAS and TOS results were evaluated by using REL method. In histological examination, decrease in the number of spermatogenic cells in seminiferous tubules was the most important finding in the testes of rats in the diabetes group, whereas vitamin D significantly prevented this condition. In immunohistochemical examination, it was observed that the level of irisin in the diabetic group decreased compared to the control group and vitamin D application increased the level of irisin. When apoptotic cell numbers were compared, it was observed that apoptotic cells in the diabetes group increased compared to the control group, whereas vitamin D application decreased the number of apoptotic cells. In biochemical analyzes, the levels of tissue and serum irisin and levels of TAS were decreased and the level of TOS was increased in the diabetes group. Diabetes+vitamin D group compared with the diabetes group, tissue and serum irisin levels and TAS levels were increased, while TOS level was found to be decreased. Vitamin D group was similar to diabetes+vitamin D group. As a result, it is thought that the application of vitamin D significantly eliminates the negative effects of diabetes on the testis and may contribute to the treatment of diabetes. Key Words: Diabetes, Testis, Irisin, Vitamin D, Apoptosis.