HEPATİT B VİRÜSÜNÜN HBSAG GENİNİN POLİMERAZ ZİNCİR REAKSİYONU YÖNTEMİYLE GÖSTERİLMESİ

Abstract

Bu çalışmada, Hepatit B virüsünün (HBV) yüzey antijeni geni (HBsAg), polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemiyle çoğaltıldı ve bir ekspresyon vektörü içine klonlandı. Öncelikle kronik HBV'li bir hastanın serumundan HBV DNA'sı elde edildi. Daha sonra, HBsAg geni pcDNA3.1/V5 His-TOPO vektörü içine yerleştirildi. Elde edilen rekombinant plazmit E.coli hücrelerinin transformasyonunda kullanıldı. Vektör içindeki HBsAg geninin varlığı polimeraz zincir reaksiyonu tarama deneyi (PZR-T) ile tespit edildi. Ayrıca, aynı amaç için restriksiyon enzim kesim deneyi yapıldı. Böylece HBV'nin HBsAg geni bir ekspresyon vektörü içine yerleştirildi. Rekombinant vektör, ilerde DNA immünizasyonu ve ELISA yapımı gibi farklı çalışmalar için kullanılabilecektir. Anahtar Kelimeler: Hepatit B virüsü, polimeraz zincir reaksiyonu, klonlama.

In the present study, Hepatitis B (HBV) surface antigen (HBsAg) was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and cloned into an expression vector. Firstly, HBV DNA was extracted from serum a patient with chronic HBV. Then, HBsAg gene was placed into pcDNA3.1/V5 His_TOPO vector. The resulting recombinant plasmid was used for transformation of E. Coli cells. The presence of HBsAg gene in the vector was confirmed by PCR- Screening assay. Furthermore, Restriction enzyme cutting assay was performed fot the same purpose. So HBsAg gene of HBV was cloned into an expression vector. The recombinant vector will be used for further studies such as DNA immunization and ELISA development in the future. Key words: Hepatitis B virus, polymerase chain reaction, cloning.