Sığır rumen doku arginazi ve subünitelerinin molekül ağırlığının araştırılması

Abstract

Bu çalışma, sığır rumen doku arginazının ve subünitelerinin molekül ağırlığının tespiti, izoenzimlerinin var olup olmadığının açığa çıkarılması, enzimin oligomerik yapısını oluşturmak üzere kaç subünitenin biraraya geldiğinin ve bu subünitelerin molekül ağırlığının identikal olup olmadığının saptanması amacı ile yapılmıştır. Bu amaçla arginaz, sığır rumen dokusundan kısmi olarak izole edilmiş, yukarıda bahsedilen özellikleri araştırılmış ve diğer doku arginazlannınki ile karşılaştırılmıştır. Enzimin saflaştırılmasında homojenizasyon, ısıtma, aseton ile muamele, amonyum sülfatla çöktürme, DEAE-sephacel kromatografi ve Sefadeks G-150 jel filtrasyon işlemleri kullanılmıştır. Saflaştırılmış enzimin spesifik aktivitesi rumen homojenatından yaklaşık 150 kez daha fazla bulunmuştur. Nativ enzimin molekül ağırlığı sefadeks G-150 jel filtrasyonla 122 500 ± 2500 Da, subünitelerinin molekül ağırlığı ise SDS-PAGE ve sefadeks G-IOO jel filtrasyonla 44 000 ± 1000 ve 34 500 ± 500 Da olarak saptanmıştır. Nativ enzim, iki farklı molekül ağırlığa sahip subünitelerin birleşmesi ile meydana gelen bir trimerdir. Diğer memeli arginazlarına benzer olarak sığır rumen doku arginazı için de optimum pH 10'dur. Enzim bir metaloenzimdir ve optimal MnCb konsantrasyonu 3 mM'dır. Mn yanında Ni de enzimin aktivatörüdür. Saflaştırılmış enzim, aktivitesini buzdolabı, oda ısısı ve deep freezde giderek kaybettiğinden dayanıksızdır. Enzim -30 °C 'de (deep freezde) 9 günde aktivitesinin *7c 50'sini kaybeder. DEAE- sephacel kromatografi ile sığır rumen doku arginazının tek bir anyonik formunun varlığı gösterilmiştir. Yani sığır rumen doku arginazı tek bir izoenzim içermektedir. Sığır rumen dokusundan izole edilen arginaz, diğer doku arginaz izoenzimleri ile karşılaştırıldığında A2 veya A4 formu olabilir.