Mastitisli süt ineklerinden izole edilen streptokok ve stafilokok etkenlerinde genetik polimorfizmin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada, subklinik mastitis şüpheli İneklerden izole edilen koagulaz (coa) pozitif Staphylococcus aureus ve CAMP-faktör (çfb) geni pozitif Streptococcus agalactiae suşları arasındaki genetik farklılıkların varlığı, Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) ve Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) yöntemleri ile incelendi. S.aureus için toplanan ve Kaliforniya Mastitis Testinde (CMT) pozitif olan süt örneklerinin (n = 700) bakteriyolojik kültüründe 367 örnekten üreme tespit edildi. Bunlar arasındaki 200 (% 28.6) Örnek tür spesifik Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) ile S. aureus olarak identifiye edildi. Coa geninin PCR amplifikasyonu sonucunda 161 S. aureus izolatı coa pozitif bulundu. Coa PCR'da, İzolatların büyük çoğunluğunda (n = 135, % 83.9) moleküler uzunlukları 500-1400 bp arasında değişen tek bir bant oluşumu gözlenirken, az sayıdaki İzotatta (n = 26, % 16.1) çift amplİfikasyon ürünü elde edildi. AluI ve Hin6I restriksiyon enzimleriyle gerçekleştirilen coa-RFLP analizinde, sırasıyla 23 ve 22 bant profili gözlemlendi. Primer 786 ve OPS 11 primerleri ile yapılan RAPD yönteminde ise sırasıyla 32 ve 30 farklı profil elde edildi. Bu çalışmada ayrıca, Türkiye'nin doğu ve güneydoğusundaki beş farklı bölgedeki süt ineklerinden toplanan süt örnekleri S. agalactiae yönünden incelendi. Kaliforniya Mastitis Testinde (CMT) pozitif olan süt örneklerinin (n = 820) bakteriyolojik kültüründe 199 örnekten üreme tespit edildi. Bunlar arasındaki 85 (%10,4) örnek hem tür spesifik Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) hem de cfb-PCR ile S. agalactiae olarak İdentİfıye edildi. Amplifıye edilen cfb-PCR ürünlerinin Alul ve Tsp509l restriksiyon enzimleriyle muamelesi sonucunda tüm izolatlar identikal restriksiyon profilleri gösterdi. OPB 18 primeri ile yapılan RAPD yönteminde ise 18 farklı profil elde edildi. Sonuç olarak, S.agalacliae için RAPD ve S. aureus için coa-RFLP ve RAPD yöntemlerinin, sığır orijinli S.aureus ve S.agalactiae izolatlarının tiplendirilmesinde konvansiyonel yöntemlere karşı iyi bir alternatif olarak kullanılabileceği ve dolayısıyla stafılokokal ve streptokokal mastitislere karşı etkili kontrol stratejilerinin geliştirilmesi yönünde faydalı veriler sağlayacağı düşünülmektedir.