N-ASETİLSİSTEİN'İN DİYABETİK SIÇAN TESTİS DOKUSUNDA TRANSİENT RESEPTÖR POTANSİYEL MELASTATİN 2 (TRPM2) KANALLARININ EKSPRESYONUNA ETKİLERİ

Abstract

Amaç: Diabetes mellitus (DM), mikrovasküler ve makrovasküler komplikasyonlarla seyreden kronik metabolik bir hastalıktır. Diyabetik erkeklerde, artmış oksidatif strese bağlı olarak testislerde germ hücrelerinde apoptozisde artış meydana gelmekte ve testiküler fonksiyon bozuklukları ortaya çıkmaktadır. N-Asetilsistein (NAS), sülfidril grubu içeren bir molekül olup antioksidan özellik göstermektedir. Bu çalışmada, streptozotosin (STZ) ile oluşturulan deneysel diyabet modelinde NAS'in, sıçan testis dokusundaki apoptotik değişiklikler ve Transient Reseptör Potansiyel Melastatin2 (TRPM2) kanal ekspresyonuna etkilerinin incelenmesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Çalışmada, 28 adet 8-10 haftalık Wistar albino cinsi erkek sıçanlar kullanıldı. Deney hayvanları her grupta 7 hayvan olacak biçimde 4 gruba ayrıldı. Kontrol grubuna deney süresi olan 8 hafta boyunca herhangi bir uygulama yapılmadı. NAS grubuna 100mg/kg/gün NAS intraperitoneal (i.p) olarak uygulandı. Diyabet grubuna tek doz 50 mg/kg streptozotosin (STZ) fosfat-sitrat tamponunda çözdürülerek i.p olarak uygulandı. Diyabet + NAS grubuna ise 50 mg/kg STZ i.p olarak uygulanmasından sonra diyabetin oluşumunu takiben NAS 100 mg/kg/gün i.p olarak verildi. Deney sonunda sıçanlar anestezi altında dekapite edildi ve testis dokuları çıkartıldı. MDA ve TRPM2 mRNA düzeyleri için testis dokuları çalışmanın sonuna kadar –80OC'de saklandı. Histolojik çalışma için rutin takip işlemi ile dokular parafin bloklara gömüldü. Bloklardan alınan kesitlere apoptotik hücrelerin belirlenmesi için TUNEL metodu, TRPM2 immünreaktivitesi için avidin-biotin-peroksidaz yöntemi uygulandı. Bulgular: Çalışmamızda kontrol grubu ile NAS grubu arasında bakılan parametrelerde anlamlı bir farklılık yoktu. Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında diyabetik grupta MDA ve apoptozis anlamlı olarak artmış iken TRPM2 seviyesi azalmıştı. Diyabetik grup ile karşılaştırıldığında Diyabet + NAS grubunda ise MDA ve apoptozis anlamlı olarak azalmış iken TRPM2 seviyesi artmıştı. Sonuç: Sonuç olarak, deneysel diyabetin testis dokusunda MDA ve apoptotik hücreleri arttırdığı, TRPM2 seviyelerini azalttığı, tedavi olarak verilen NAS'ın MDA ve apoptotik hücreleri azalttığı görüldü. Diyabetin testis dokusunu etkilemesinin patofizyolojisindeki rolünün aydınlatılabilmesi için gelecekte farklı deneysel diyabet süreleriyle yapılacak çalışmalara ihtiyaç olduğu kanaatine varılmıştır. Anahtar kelimeler: Diabetes mellitus, NAS, Testis, TRPM2, Sıçan.

Objective: Diabetes mellitus (DM) is a chronic metabolic disease characterized by microvascular and macrovascular complications. At diabetic males, apoptosis increases at germ cells in testes due to increased oxidative stress and testicular dysfunctions occurs. N-acetylcysteine (NAC), is a molecule containing sulfhydryl groups exhibits antioxidant properties. The aim of this study is determine the effects of NAC on apoptotic changes and transient receptor potential melastatin 2 (TRPM2) expression in the rat testis tissue at STZ induced DM. Material and Method: We used 28 male 8-10 weeks old Wistar albino rats. Rats were divided into 4 groups each contains 7 rats. No application was made to control group 8 weeks. To NAS group, 100mg/kg NAC was enjected intraperitoneally (ip) . To diabetic group 50 mg/kg streptozocin (STZ) that was dissolved in phosphate-citrate buffer was injected. In diabetes + NAC group, 50 mg/kg STZ was injected and NAC was given 100 mg/kg/day orally after confirmed of diabetes. Finally rats were decapitated and testis tissues were removed. For MDA and TRPM2 mRNA levels, the testicular tissues were stored at 80 C until the end of study. With routine procedures, tissues were embedded in paraphine blockes. For detecting apoptotic cells TUNEL method and for TRPM2 immunreactivity ''avidin-biotin-peroxidase'' method was applied. Results: In our study there were no significant differences about analyzed parameters between NAC group and the control group. Compared with control group MDA and apoptosis were increased significantly at diabetic group but TRPM2 levels were decreased. Compared with diabetic group MDA and apoptosis were decreased significantly at diabet+NAS group but TRPM2 levels were increased. Conclusion: As a result, experimental diabetes increases MDA and apoptotic cells, decreases TRPM2 levels at testis tissue, administration of NAC as treatment decreases MDA and apoptotic cells. We concluded, more experimental studies with different duration of diabetes are needed to clarify the effects of diabetes in the pathophysiology of testicular tissue damage Key words: Diabetes mellitus, NAC Testis, TRPM2, Rat