TAVŞANLARDA SPERMA DONDURMA İŞLEMİNİN İNDÜKLEDİĞİ SPERMATOZOONLARDAKİ SOĞUK ŞOK HASARLARI ÜZERİNE TAXİFOLİNİN ETKİSİ

Abstract

Bu çalışmada tavşan spermasına ilave edilen taxifolin (TAX)'in dondurma işleminin indüklediği spermatozoonlardaki soğuk şok hasarları üzerine etkisinin araştırılması amaçlandı. Bu amaç doğrultusunda, çalışmada 6 adet erişkin Yeni Zelanda tavşanından suni vajen yardımıyla haftada bir kez sperma alındı. Alınan spermalar 38 °C'de pooling yapıldı ve 4 eşit hacme bölündü. 38 °C'de TAX içermeyen (Kontrol grubu), 50 ?M (TAX-50 grubu), 100 ?M (TAX-100 grubu) ve 200 ?M (TAX-200 grubu) TAX içeren tris + yumurta sarısı sulandırıcısı ile sulandırıldı ve sıcaklıkları 4 °C'ye düşürüldü. Ekilibrasyon işlemini müteakip 0.25 mL'lik payetlere çekilen spermalar otomatik sperma dondurma cihazında donduruldu ve -196 °C'deki sıvı azot tankında saklandı. 38 °C'deki su içerisinde 25 saniye bekletilerek çözdürülen spermalarda motilite, kinematik parametreler, morfolojik şekil bozuklukları, membran bütünlüğündeki değişiklikler, mitokondriyal membran potansiyeli, ölü-canlı oranı, akrozom bozukluklarına yönelik analizler ile oksidatif stres analizleri yapıldı. 50 ?M TAX ilavesi motilite (toplam, progressif, hızlı ve statik), yüksek mitokondriyal membran potansiyeli (YMMP) ve akrozomal hasarlı spermatozoon oranlarında kontrole göre anlamlı iyileşmeler sağladı. Kontrol ile karşılaştırıldığında TAX-50 ve TAX-100 gruplarındaki malondialdehit (MDA) düzeyleri önemli derecede düşük bulunurken, TAX-200 grubundaki MDA düzeyi yüksek, canlı spermatozoon oranı ise düşük bulundu. Öte yandan kinematik parametreler, morfolojik bozukluklar, membran bütünlüğü ve antioksidan düzeyleri bakımından gruplar arasında önemli bir farklılık tespit edilmedi. Sonuç olarak, TAX'ın düşük dozunun olumlu, yüksek dozunun ise olumsuz bir etkiye sahip olduğu gözlendi. Dolayısıyla sulandırıcılara düşük doz (50 ?M) TAX ilavesinin tavşan spermasının dondurulması esnasında şekillenen soğuk şok hasarlarının azaltılmasında faydalı bir katkı maddesi olacağı kanaatine varıldı.In this study, it was aimed to investigate the effect of taxifolin (TAX) added to rabbit semen on cold-shock damages in spermatozoa induced by freezing. For this purpose, semen was collected from 6 adult New Zealand rabbits once a week with the help of artificial vagina. The collected semen were pooled at 38 °C and divided into 4 equal volumes. They were diluted with TAX-free (Control group), 50 ?M (TAX-50 group), 100 ?M (TAX-100 group) and 200 ?M (TAX-200 group) TAX-containing tris + egg yolk extender at 38 °C and their temperatures were lowered to 4 °C. Following equilibration, semen drawn into 0.25 mL straws were frozen in an automatic semen freezing device and stored in liquid nitrogen container at -196 °C. The analyses for motility, kinematic parameters, morphological deformities, changes in membrane integrity, mitochondrial membrane potential, dead-live ratio, acrosomal disorders and as well as oxidative stress analyses were performed on semen that were thawed in 38 °C water for 25 seconds. Addition of 50 ?M TAX provided significant improvements in motility (total, progressive, rapid and static), high mitochondrial membrane potential and the ratios of spermatozoa with acrosomal damage compared to control. When compared to the control, malondialdehyde (MDA) levels in the TAX-50 and TAX-100 groups were found to be significantly lower, while the MDA level was high and viable spermatozoa ratio was low in the TAX-200 group. On the other hand, there was no significant difference between the groups in terms of kinematic parameters, morphological deformities, membrane integrity and antioxidant levels. As a result, it was observed that the low dose of TAX had a positive effect and the high dose had a negative effect. Therefore, it was concluded that the addition of low-dose (50 ?M) TAX to the extenders would be a useful additive in reducing cold-shock damage that occurs during freezing of rabbit semen.