İZOLE SIÇAN MİYOMETRİYUMUNDA METABOLİK İNHİBİSYON VE KASILABİLME: HÜCRE İÇİ KALSİYUM HOMEOSTAZİSİNİN ROLÜ

Abstract

Bu çalışmada, izole sıçan miyometriyumunda metabolikinhibisyona bağlı gelişen kontraktilite değişikliklerinde hücre içi kalsiyumhomeostazisinin rolünün incelenmesi amaçlanmıştır.Servikal dislokasyondan sonra, virjin sprague dawley cinsi dişisıçanlardan miyometriyum kesitleri alınarak içerisinde 37ºC'de (pH 7.4)krebs solüsyonu bulunan ve % 95 O2 - % 5 CO2 ile sürekli gazlandırılanizole organ banyosuna asıldı. Kaslar 20 mM KCl ile standardize edildi.Farklı gruplar halinde potasyum siyanür (KCN), dinitrofenol (DNF),dantrolen sodyum (Dantrolen-Na) ve etilen glikol tetra asetik asit (EGTA)organ banyosuna uygulanarak izometrik kontraksiyonların frekans veamplitütlerine olan etkileri 10 dakikalık periyotlar halinde değerlendirildi.Sonuçların istatistiksel değerlendirilmesinde sırasıyla ikilikarşılaştırmalarda student-t testi, üçlü karşılaştırmalarda ise Kruskall-Wallis varyans analiz testi kullanıldı.KCN (0.3 mM) ile DNF (0.8 mM)'nin kontrol kaydının ardındanortama ilave edilmesi ile kontraksiyonlarda hemen başlayan belirgin birinhibisyon meydana geldi (n=8). 10 µM dantrolen-Na hem KCN (0.3 mM,n=8) hem de DNF (0.8 mM, n=6)' nin inhibitör etkisini zayıflattı. EGTA'nın1 mM'lık konsantrasyonu ise hem KCN (0.3 mM, n=7) hem de DNF (0.8mM, n=6) inhibitör etkisini düşük düzeyde azalttı. Dantrolen-Na ileEGTA'nın etkileri istatistiksel olarak karşılaştırıldığında dantrolen-Na'nınoluşan inhibitör etkiyi EGTA'ya göre çok daha belirgin bir şekildezayıflattığı görüldü.Bu çalışmanın bulgularında, metabolik inhibisyona bağlı gelişenkontraktil inhibisyonda, hücre içi Ca++ salınımındaki değişiklerin rolüolduğu ve hücre içi depolardan Ca++ salınımının engellenmesi ile hücre içiserbest Ca++'nın bağlanması gibi uygulamaların Ca++ homeostazisinideğiştirerek kasılmalardaki inhibitör etkinin, kısmen de olsa geridöndürülebildiği gösterilmiştir.Anahtar kelimeler: Miyometriyum, metabolik stres, KCN, DNF,dantrolen-Na, EGTA.The aim of this study was to investigate the role of changes inintracellular calcium homeostasis metabolic stress (induced by chemicalhypoxia) on contractility of myometrium. Myometrial strips were isolatedfrom virgin Sprague Dawley rats after dislocation and suspended in onisolated tissue bath containing Krebs solution continuously bubbled with%95 O2 and %5 CO2 maintained at 37 C°? de (pH 7.4). After manifestationof spontaneous contractions were equilibrated under resting tensiondantrolene-Na, ethylene glycol tetra acetic acide (EGTA), dinitrophenole(DNP) and potassium cyanide (KCN) were applied to the tissue bath. Theamplitude and frequency of contractions were evaluated by 10-minintervals. Student-t test was used for statically analysis of data. Addingeither DNP (0.8 mM, n=8) or KCN (0.3 mM, n=8) to tissue bath caused arapid inhibition in KCl induced myometrium contractions. Application ofdantrolene-Na (10 µM) and EGTA (1 mM) caused a decrease in inhibitoryeffects of metabolic stress induced by KCN (0.3 mM, n=8) DNP (0.8 mM,n=6). However, statistical analysis clearly showed that dantrolene-Na hasa markedly greater effect compared to EGTA on inhibitory effect ofmetabolic stress.In conclusion, a result from this study indicates that Ca++ ion play arole, at least partially, on DNP and KCN induced inhibition of myometrialcontractions of rat. However, this inhibition can be reversed by inhibitionof Ca++-release from intracellular stores and chelation of intracellularcalcium.Key words: myometrium, DNP, EGTA, KCN, Dantrolene-Na, metabolicstress.