SIÇAN ARKA KÖK DÜĞÜM HÜCRELERİNDE KALSİYUM-BAĞIMLI KLOR KANALLARINA KLOROTOKSİNİN ETKİLERİ

Abstract

Bu çalışmanın amacı sıçan arka kök düğüm (AKD) sinir hücrelerinde klorotoksinin kalsiyum bağımlı klor kanallarına etkisini belirlemektir. Sıçan arka kök düğümleri yeni doğan sıçanlardan diseke edilerek enzimatik ve fiziksel muamelelerle izole tek hücrelere ayrıştırıldı ve sinir büyütme faktörü içeren kültür vasatı içerisinde 37°C'de %5 karbondioksit içeren nemli bir inkübatörde kültüre edildi. Bu hücrelerden patch kenetleme tekniğinin akım kenetleme kayıt formu kullanılarak aksiyon potansiyelleri kayıt edildi. Kalsiyum bağımlı klor kanal akımlarının aksiyon potansiyeli depolarize edici ard potansiyellerinden sorumlu olduğu zıtlanma potansiyeli ve niflumik asit kullanılarak yapılan çalışmalardan tespit edildi. Klorotoksinin 3 ve 10p.M dozları depolarize edici ard potansiyelleri doz bağımlı olarak anlamlı derecede inhibe etti. Bu çalışmanın sonuçları sıçan ÂKD sinir hücrelerinde klorotoksinin aksiyon potansiyeli ard potansiyellerini kalsiyum bağımlı klor kanallarını bloklayarak inhibe ettiğini göstermektedir. Anahtar kelimeler : aksiyon potansiyeli, klorotoksin, hücre kültürü, patch kenetleme, kalsiyum bağımlı klor kanalı

The aim of this study was to investigate the actions of chlorotoxin on calcium-activated chloride channel conductance in cultured rat dorsal root ganglion (DRG) neurones. Dorsal root ganglia were dissected out and isolated as single cells by enzymatic and physical procedures and placed in humidified incubator containing %5 C02 at 37 °C. Action potentials were recorded from these cells using the whole cell current clamp mode of the patch clamp technique. Reversial potential studies and using niflumic acid the after depolarisations were determined to be carried out by calcium activated chloride conductance. Application of 3 and 10 u.M chlorotoxin significantly inhibited after depolarisations in a dose dependent manner. Results from this study indicates that chlorotoxin inhibits action potential after depolarisations in cultured rat DRG neurones by blocking calcium activated chloride channels. Key words : action potential, chlorotoxin, cell culture, patch clamp, calcium activated chloride channel.