İMMORTALİZE RHYPOE-7 HÜCRELERİNDE RFRP-3 SALGILANMASININ LEPTİN TARAFINDAN KONTROLÜ ÜZERİNE İN VİTRO ÇALIŞMALAR

Abstract

Hipotalamik RFamid peptidler, gonadotropin-inhibe edici hormon (GnIH) ve ortolog peptitler, ilk olarak memelilerde keşfedilmiş olup RFamide peptit süperailesine (RFRP-3) aittir ve bu peptitler, hipotalamus-hipofiz-gonadal (HHG) üreme aksının önemli düzenleyicileri arasında gösterilmektedir. GnIH sadece üreme fonksiyonlarıyla ilişkili olmayıp aynı zamanda gıda alımının düzenlenmesinde de rol oynadığından yağ hücrelerinde üretilen leptinin RFRP-3 nöronları üzerinde bir etkiye sahip olduğu ileri sürülmüştür. Sıçan rHypoE-7 hücre hattı, nöroendokrin faktörlerin RFRP-3 nöronları üzerindeki etkisini ortaya çıkarmak için geliştirilmiş bir modeldir. Leptinin besin alımı ve üreme üzerindeki etkisini RFRP-3 aracılığıyla gösterip göstermediğini belirlemek için leptin ile muamele görmüş rHypoE-7 hücrelerinde hücre içi serbest kalsiyum ([Ca+2]i) değişiklikleri incelenmiştir. Bu çalışmanın amacı, leptinin immortalize rHypoE-7 hücrelerindeki RFRP-3 üzerine etkisini in vitro olarak incelemektir. Çalışmada RFRP-3 salgılayan rHypoE-7 hücreleri kullanıldı. Leptinin rHypoE-7 hücrelerinde RFRP-3 salgılanması ve [Ca+2]i sinyalleşmesi üzerindeki etkileri incelendi. rHypoE-7 hücreleri Ca+2 duyarlı floresan boya ile yüklendi ve [Ca+2]i cevapları floresan görüntüleme sistemi kulanılarak 340/380 nm oranındaki değişikliklerle belirlendi. Medyumdaki GnIH konsantrasyonunu belirlemek için ELISA yöntemi kullanıldı. Bu çalışma sonunda leptinin, immortalize RFRP-3 nöronlarında [Ca+2]i değiştirdiği gösterilmiştir. Bu da leptinin, gonadotropin serbestleştirici hormon (GnRH) aktivitesini RFRP-3 nöronları aracılı düzenleyebileceğini açıkça göstermektedir.Hypothalamic RFamide peptides, gonadotropin-inhibitory hormone (GnIH) and orthologous peptides, which were discovered in mammals belonging to the RFamide peptide superfamily (RFRP-3), seem to be important regulators of hypothalamus-pituitary-gonadal (HPG) reproductive axis. Since GnIH is not only involved in reproductive function but also in the regulation of food intake, leptin produced by adipose cells has been suggested to have effects on RFRP-3 neurons. rHypoE-7 cell line was developed as a model to explore the effects of neuroendocrine factors on RFRP-3 neurons. To investigate whether leptin exerts its effects on food intake as well as reproduction by means of RFRP-3 neurons, changes in intracellular free Ca2+ levels ([Ca2+]i) were observed in rHypoE-7 cells treated by leptin. The main aim of the present study is to examine the effects of leptin on RFRP-3 in immortalize rHypoE-7 cells as in vitro. In the present study rHypoE-7 cells relasing RFRP-3 were used. The effects of leptin on RFRP-3 release and calcium signaling in rHypoE-7 cells were investigated. In rHypoE-7 cells loaded with calcium sensitive dye and [Ca+2]i responses were quantified by the changes in 340/380nm ratio using fluorescence imaging system. The ELISA kit was used to determine GnIH concentrations from the media. In conclusion, leptin changes [Ca+2]i level in immortalized RFRP-3 neurons. This indicates that leptin may modulate GnRH activity via RFRP-3 neurones.