TAVŞAN BÖBREK ARGİNAZ AKTİVİTESİ İÇİN OPTİMAL ŞARTLARIN BELİRLENMESİ

Abstract

Bu çalışmada tavşan böbrek dokusundaki arginazın ölçülmesi için böbrek dokusundaki arginazın optimize edilmesi hedeflenmiştir. Böbrek doku arginazının optimum pH'sının, preinkübasyon ısısının, inkübasyon ve preinkübasyon zamanının, Mn++ ve L-arginin konsantrasyonu tespit edilmiştir. Şartlar optimize edildikten sonra farklı türlerin böbrek arginaz düzeyleri belirlenmiştir. Tavşan böbrek doku arginazı için preinkübasyon ısısı 53°C, preinkübasyon zamanı 15 dakika, inkübasyon zamanı 10 dakika, en uygun tampon NaHCO3-NaOH tamponu ve optimum pH 10,1 şeklinde tesbit edilmiştir. Enzimin aktivitesi, 1 mM MnCl2 konsantrasyonunda en yüksek değere ulaşmıştır. Enzimin aktive olması için Mn+2 iyonlarının ve 53 °C' de preinkübasyonun uygun olduğu kabul edilmiştir. Tavşan böbrek doku arginazının L-arginine karşı olan Km'i 12,5 mM şeklinde bulunmuştur. Tavşan, inek, koyun, keçi, rat, tavuk ve bıldırcından alınan örneklerde arginaz enziminin miktarları tespit edilmiştir. Koyun, keçi, sığır, tavşan, tavuk, bıldırcın ve rat böbrek arginaz aktiviteleri sırasıyla 4,17 ± 1,19, 13,51 ± 1,97, 1,22 ± 0,25, 20,84 ± 3,38, 20,86 ± 4,53, 59,68 ± 13,03 ve 16,28 ± 2,04 ünite olarak bulunmuştur. Çalışılan dokular içinde en yüksek aktivite bıldırcın böbrek dokusunda en düşük aktivite sığır böbrek dokusunda saptanmıştır.In this study, for measuring of arginase in rabbit kidney was aimed to optimize of arginase in kidney tissue. Optimum pH, preincubation temperature, preincubation time, incubation time, Mn++ concentration and L-arginine concentration of arginase in kidney tissue was determined. Arginase levels were measured in kidney tissues of different species after conditions were optimized. Its was found to be preincubation temperature 53 °C, preincubation period 15 minutes, incubation period 10 minutes and optimum pH 10,1 in NaHCO3-NaOH buffer for arginase in rabbit kidney tissue. Enzyme achieved its highest activity at 1 mM MnCl2 concentration. Consequently, it was determined that Mn+2 ions and preincubation at 53 °C were essential for the activation of the enzyme. Km of arginase in rabbit kidney tissue for L-arginine were measured to be 12,5 mM. Levels of the arginase enzyme in kidney of the sheep, goat, cattle, rabbit, chicken, quail and rat were determined and found as 4,17 ± 1,19; 13,51 ± 1,97; 1,22 ± 0,25; 20,84 ± 3,38; 20,86 ± 4,53; 59,68 ± 13,03; 16,28 ± 2,04 unites, respectively. Among the studied species, the highest arginase activity was found in kidney of the quails, the lowest arginase activity was found in kidneys of the cattles.